процесс экстракции силимарина
Силимарин, смесь флавонолигнанов, проявляющих множество фармакологических свойств, получают из плодов расторопши пятнистой (Silybum marianum L. Gaertner). Из-за высокого содержания липидов в плодах чертополоха Европейская фармакопея рекомендует двухэтапный процесс его экстракции. Сначала плоды обезжиривают в течение 6 ч, используя н-гексан; во-вторых, силимарин экстрагируют метанолом еще в течение 5 часов.
Представленные данные показывают, что этот чрезвычайно долгий традиционный процесс экстракции Сокслета можно сократить до нескольких минут с помощью жидкостной экстракции под давлением (PLE). PLE также позволяет исключить стадию обезжиривания, требуемую в традиционной процедуре, тем самым упрощая процедуру экстракции силимарина и предотвращая потерю силимарина, вызванную обезжириванием. Извлечение PLE, полученное в оптимизированных условиях экстракции, явно лучше, чем в рекомендованной Фармакопеей процедуре экстракции Сокслета.
Выходы PLE силихристина, силидианина, силибина A, силибина B, изозилибина A и изозилибина B в ацетоне составляют 3,3, 6,9, 3,3, 5,1, 2,6 и 1,5 мг / г обезжиренных фруктов соответственно. 5-часовая экстракция Сокслета метанолом на обезжиренных фруктах дает только ~ 72% от количества силимарина, полученного за 10 минут PLE при 125 ° C.
Что такое расторопша?
Silybum marianum L. Gaertner, обычно называемыйрасторопша, блаженный молочный чертополох, марианский чертополох, чертополох Мэри или чертополох Святой Марии' s Thistle, является однолетним или двулетним растением из семейства сложноцветных. Это растение, первоначально произрастающее в Южной Европе и Азии, теперь встречается по всему миру (1). Этот опасный сорняк в настоящее время культивируется как лекарственное растение и является одной из самых важных лекарственных культур в Европе.
Расторопша используется в лечебных целях более 2000 лет, чаще всего для лечения заболеваний печени (цирроз и гепатит), а также для защиты печени от токсичных веществ (2–5). Недавний интерес к этому растению был стимулирован исследованиями, показавшими его исключительно высокую противоопухолевую активность. Экстракты из растения в настоящее время интенсивно изучаются с целью экспериментальной химиопрофилактики рака и уменьшения побочных эффектов химиотерапии (6). Недавние сообщения показали, что экстракты этого растения также обладают многими другими фармакологическими свойствами, такими как противовоспалительное и антифибротическое действие (2, 7, 8).
Силимарин, смесь флавонолигнанов, проявляющих множество фармакологических свойств, получают из семян расторопши (Silybum marianum L. Gaertner). Обычные процедуры, используемые до сих пор для экстракции силимарина, в основном основаны на методах медленной высокотемпературной экстракции растворителем. Недостатки, связанные с этими методами, привели к поиску новых альтернативных процессов экстракции, которые дополнительно могли бы улучшитьэкстракты силимаринакачественный. Последнее особенно важно при применении силимарина. Фактически, полученные экстракты силимарина могут содержать токсичные органические остатки, которые необходимо удалить, чтобы удовлетворить потребности потребителей.
В попытке улучшить процесс экстракции силимарина и сделать его более эффективным и экологически безопасным, недавно была проведена экстракция растворителем с помощью микроволнового излучения, экстракция растворителем с помощью ультразвука, экстракция жидкостью под давлением, экстракция с помощью ферментов, сверхкритическая жидкостная экстракция и особенно субкритическая водная экстракция. также были разработаны и применяются методы экстракции горячей водой под давлением.
Материалы и методы
Растительный материал
Сушеные плоды S. marianum L. Gaertner были приобретены в местной аптеке (Люблин, Польша) осенью 2011 года. Достаточно большая репрезентативная проба растительного материала (около 500 г) была измельчена и просеяна, чтобы получить размер частиц 0,4 мм. Для экстракции использовали точно взвешенные порции материала.
Материалы и реагенты
Стандартизированный сухой экстракт S. marianum L. Gaertner и силибин B (с чистотой 98%), применяемый в качестве стандартов, был приобретен у Sigma-Aldrich, Польша. Ацетон, этилацетат, фосфорная кислота, н-гексан (все они были чистыми для аналитических реактивов) и метанол (чистые для аналитических реактивов и чистые для ВЭЖХ) были приобретены на Польском химическом заводе (POCh, Гливице, Польша). Воду очищали с использованием системы Milli-Q от Millipore (Millipore, Бедфорд, Массачусетс, США). В качестве диспергирующего агента в ячейку PLE использовали нейтральное стекло, подаренное местным стекольным заводом (фракция 0,4–0,6 мм).
Жидкая экстракция под давлением
PLE выполняли на приборе Dionex ASE200 (Dionex Corp., Саннивейл, Калифорния, США). Растительный материал (0,5 г) смешивали с инертным материалом (нейтральное стекло) и помещали в экстракционную ячейку из нержавеющей стали объемом 22 мл, содержащую фильтровальную бумагу на дне. Еще один кружок фильтровальной бумаги помещали наверху экстракционной ячейки. Наконец, ячейка была плотно закрыта и помещена в нагревательную печь.
Содержимое ячейки извлекали при рабочем давлении 60 бар. В конце процесса экстрагированный образец был промыт, используя объем растворителя, равный 60% от объема экстракционной ячейки. Наконец, образец продували в течение 60 с, применяя азот под давлением (150 фунтов на квадратный дюйм), и экстракт собирали в 60-миллилитровую стеклянную пробирку с резиновым колпачком с тефлоновым покрытием. Объем собранного экстракта составлял от 25 до 31 мл, в зависимости от плотности упаковки экстракционной ячейки. Полученный экстракт переносили в мерную колбу на 50 мл и доводили до нужного объема растворителем подходящего типа. Три независимых экстракции были выполнены в одинаковых условиях. Между прогонами систему промывали подходящим экстракционным растворителем.
Изучаемыми параметрами PLE были тип растворителя (метанол, ацетон и этилацетат), температура (50, 75, 100, 125 и 150 ° C), время (5, 10, 15 и 20 мин) и количество циклов экстракции (1 –5). Для процесса обезжиривания PLE в качестве растворителя применяли н-гексан, и исследуемыми параметрами были температура (50 и 100 ° C) и время (5 и 10 мин) удаления липидов. Экстракты ацетон и этилацетат упаривали досуха в вакууме и повторно растворяли в метаноле перед хроматографическим анализом.
Экстракция Сокслета
Исчерпывающие экстракции в аппарате Сокслета проводили с использованием порций материала 2,0 г. Точно взвешенные образцы переносили в бумажный наперсток. Загруженную гильзу вставляли в экстрактор Сокслета на 100 мл. Экстракции проводили в двухступенчатом процессе (n=3). На первом этапе процедуры растительный материал обезжиривали в течение 6 часов с использованием 75 мл н-гексана. Во втором случае силимарин экстрагировали в течение 5 ч 75 мл метанола. После охлаждения до комнатной температуры полученный экстракт переносили в мерную колбу на 100 мл, которую затем заполняли метанолом до ее объема. Были выполнены три независимых экстракции.
Хроматографический анализ экстрактов
Измерения ВЭЖХ выполняли на жидкостном хроматографе Dionex (Dionex Corp.), состоящем из хроматографического корпуса (LC20), содержащего автоматический впрыскивающий клапан из ПЭЭК, снабженный петлей для образцов объемом 10 мкл, градиентным насосом (GP50), детектором поглощения (AD25). и детектор с фотодиодной матрицей (PDA100). Вся хроматографическая система находилась под контролем системы сбора данных PeakNet6. Хроматографическое разделение проводили при 40 ° C с использованием колонки Prodigy ODS-2 (5 мкм, 250 × 4,6 мм, внутренний диаметр) (Phenomenex, Torrance, CA, USA). Подвижная фаза A представляла собой смесь метанола с водным раствором фосфорной кислоты, содержащую 0,5 мл 75% фосфорной кислоты в 100 мл раствора (35:65, об. / Об.). Подвижная фаза B представляла собой смесь метанола с водным раствором фосфорной кислоты, содержащего 0,5 мл 75% фосфорной кислоты в 100 мл раствора (50:50, об. / Об.). Скорость потока 0,8 мл / мин. Анализы проводили в градиенте подвижной фазы с процентным содержанием B в A, изменяющимся следующим образом: начальная концентрация, 0% B; 28 мин, 100% B; 35 мин., 100% B, 36 мин. 0% B. Перед следующим анализом колонку уравновешивали подвижной фазой, содержащей 0% B, в течение 20 мин. Каждый экстракт трижды анализировали методом ВЭЖХ. Длину волны для обнаружения флавонолигнанов устанавливали на 288 нм, и спектры УФ-видимого излучения от 210 до 500 нм также записывали для характеристики пиков.
Качественный анализ экстрактов проводился путем сравнения времен удерживания пиков и их УФ-видимых спектров в экстрактах со спектрами стандартизованного сухого силимарина. Для приготовления стандартизованного сухого раствора силимарина порцию образца 0,02 г, содержащую 5,0 мг силибина A + B, растворяли в 50 мл метанола. Пики для силихристина, силидианина, силибина A, силибина B, изозилибина A и B появляются при временах удерживания 15,1, 17,4, 27,5, 29,1, 33,6 и 34,8 мин соответственно. Количественный анализ был основан на стандарте силибина B, и использовался метод внешнего стандарта. Калибровочную кривую строили для пяти концентраций соединения в диапазоне концентраций 0,1–1,0 мг / мл. Было проведено три измерения площади пика для каждой концентрации стандартного раствора. Характерные параметры полученной калибровочной кривой: наклон 0,516 и точка пересечения 0,003. Калибровочная кривая оказалась линейной в исследуемом диапазоне концентраций. Коэффициент корреляции составил> 0,995. Из-за сложности приобретения стандартов силихристина, силидианина, силибина A, изозилибина A и B, количества этих соединений были рассчитаны путем соотнесения их хроматографических характеристик с калибровочной кривой для силибина B.
статистический анализ
Все данные выражены в виде среднего значения ± стандартное отклонение (SD). Дисперсионный анализ (ANOVA) и F-тест использовали для оценки влияния условий PLE на выход силимарина. Средние значения считались значимыми, если результат сравниваемых параметров отличался на уровне значимости P=0,05. Для проверки значимости каждого коэффициента Фишера использовались P-значения.
Полученные результаты
На рис. 1а представлена типичная хроматограмма экстракта PLE, полученного из плодов S. marianum L. Gaertner, а на рис. 1б представлена хроматограмма экстракции силимарина из раствора расторопши, полученного растворением стандартизованного сухого экстракта S. marianum L. Gaertner в метаноле (1 мг / мл). Анализ хроматограмм экстрактов PLE или Сокслета с хроматограммами для стандартизованного раствора (время удерживания, УФ-видимые спектры и индекс чистоты пиков) показал, что применяемые хроматографические условия позволяют обеспечить достаточное разрешение исследуемых соединений, пики от 1 до 6 из компонентов матрицы выборки. Пики были идентифицированы как: (1) силихристин, (2) силидианин, (3) силибин A, (4) силибин B, (5) изозилибин A и (6) изозилибин B, соответственно.
Как извлечь расторопшу?
В отличие от большинства трав, семена расторопши не очень хорошо экстрагируются в воде, поэтому не пытайтесь заварить из них чашку чая! Вместо этого ешьте свежемолотые семена или купите капсулу хорошего качества. Если вы используете семена, купите их целиком, а затем измельчите по мере необходимости (я использую кофемолку, чтобы превратить их в крупный порошок). Семена одновременно имеют маслянистый, сладкий и горький вкус - возможно, это приобретенный вкус, но они совсем не неприятны. Начните с приема от 1/2 до 1 столовой ложки в день, посыпанной вашей едой, и посмотрите, как вы себя чувствуете, регулируя количество по мере необходимости.
Ингредиенты
1 стакан теплой воды
1 чашка крепкого спирта, я использую водку
От до 1 стакана молотых семян расторопши, если возможно
инструкции
Стерилизуйте используемую банку Мейсона, поместив ее в кипящую воду примерно на 10 минут или поставив на решетку в духовке при температуре около 250 градусов на 15 минут.
Вылейте все ингредиенты в банку Мейсона.
Закройте банку новой крышкой и плотно закрутите ее кольцом.
Энергично встряхивайте банку около 1 минуты.
Поставьте банку в темное прохладное место на пять недель.
Ежедневно встряхивайте банку, чтобы семена расторопши не всплывали на поверхность и полностью пропитались спиртом и водой.
По истечении назначенного количества недель отфильтруйте расторопшу от жидкости через мелкоячеистое сито, удерживая жидкость. Если у вас нет мелкоячеистого фильтра, воспользуйтесь небольшим дуршлагом и / или выровняйте дуршлаг с несколькими фильтрами для кофе, чтобы уменьшить размер отверстий.
Как долго расторопша подействует?
Семена расторопши могут защитить клетки печени от токсичных химикатов и лекарств. Он также обладает антиоксидантным и противовоспалительным действием, снижающим уровень сахара в крови.
Улучшение показателей окислительного стресса стабильно отмечалось через 6 месяцев' продолжительность лечения специализированной системой доставки расторопши (2). Улучшение паттернов окислительного стресса отвечает за улучшение передачи сигналов инсулина и функционирования клеток печени.
Как долго следует принимать расторопшу? (ДОЗИРОВКА)
Расторопша считается безопасной при дозировке 420 мг / день перорально в разделенных дозах на срок до 41 месяца. Один источник предлагает ежедневные дозы от 12 до 15 г сухих фруктов при диспепсии и расстройствах желчевыводящей системы, в то время как экстракт, содержащий от 200 до 400 мг / день силимарина, считается эффективным при различных заболеваниях печени.
Преимущества расторопши
1. Поддерживает здоровье печени.
Одно из наиболее распространенных применений расторопши - лечение проблем с печенью. Исследование, проведенное в 2016 году, показало, что расторопша улучшает повреждение печени у мышей, вызванное диетой. Чтобы доказать, что расторопша так же полезна для печени человека, необходимы дополнительные доказательства, однако исследователи предполагают, что это действительно так. Активный ингредиент расторопши, силимарин, действует как антиоксидант, уменьшая выработку свободных радикалов. Ученые считают, что это оказывает детоксикационный эффект, поэтому расторопша может быть полезна при проблемах с печенью.
Однако до тех пор, пока не будут проведены дополнительные исследования, расторопша не рекомендуется в качестве основного метода лечения проблем с печенью. Но это может оказаться полезным дополнительным лечением.
2. Способствует здоровью кожи.
Масло расторопши можно использовать местно для улучшения здоровья кожи.
Расторопша может способствовать здоровью кожи. Исследование 2015 года показало, что расторопша помогает улучшить воспалительные состояния кожи при нанесении на кожу мышей.
В другом исследовании также было обнаружено, что расторопша оказывает антиоксидантное и омолаживающее действие на клетки кожи человека в лабораторных условиях.
Необходимы дальнейшие исследования на людях, чтобы определить, какую пользу человек может ожидать от нанесения расторопши на кожу.
3. Снижает уровень холестерина.
Высокий уровень холестерина может привести к проблемам со здоровьем сердца и увеличить вероятность инсульта.
Исследование 2006 года предполагает, что расторопша может играть важную роль в снижении уровня холестерина. Было обнаружено, что уровень холестерина был ниже у людей, принимавших расторопшу для лечения диабета, чем у тех, кто принимал плацебо.
4. Способствует снижению веса.
Первоначальные исследования на животных, проведенные в 2016 году, показали, что силимарин вызывает потерю веса у мышей, которых кормили диетой, предназначенной для увеличения веса.
Это говорит о том, что расторопша может быть полезна тем, кто хочет похудеть. Однако для подтверждения этого необходимы дополнительные исследования влияния расторопши на потерю веса у людей.
5. Снижает инсулинорезистентность.
Исследование на мышах показало, что экстракт расторопши помогает снизить инсулинорезистентность. Инсулинорезистентность - это проблема для людей с диабетом 2 типа.
Хотя это исследование предполагает, что расторопша может сыграть роль в лечении диабета, необходимы дополнительные исследования, чтобы подтвердить, снижает ли расторопша инсулинорезистентность и способствует лечению диабета.
6. Улучшает симптомы аллергической астмы.
Активный ингредиент расторопши помогает уменьшить воспаление. Исследование 2012 года показало, что силимарин помогает защитить дыхательные пути мышей с аллергической астмой от воспаления.
Необходимы дополнительные исследования, чтобы увидеть, помогает ли силимарин симптомам астмы у людей.
7. Ограничивает распространение рака.
Расторопша пятнистая может помочь остановить распространение некоторых видов рака. Обзор 2016 года показал, что экстракт расторопши подавляет рост раковых клеток при колоректальном раке.
Необходимы дополнительные исследования, чтобы определить, как расторопшу можно использовать для борьбы с раком.
8. Поддерживает здоровье костей.
Чай из расторопши может помочь предотвратить потерю костной массы, вызванную недостатком эстрогена. Расторопша может играть важную роль в поддержании здоровья костей. Исследование 2013 года показало, что расторопша помогает предотвратить потерю костной массы, в частности, на потерю костной массы, вызванную дефицитом эстрогена. Пока неясно, одинаково ли полезен расторопша для потери костной массы по другой причине. Необходимы дальнейшие исследования, прежде чем можно будет с уверенностью заключить, что расторопша поддерживает здоровье костей у людей.
9. Улучшает познание.
Исследование 2015 года показало, что расторопша увеличивает устойчивость к окислительному стрессу. Окислительный стресс - потенциальная причина болезни Альцгеймера.
Таким образом, расторопша может помочь улучшить познавательные способности и лечить дегенеративные состояния, влияющие на сознание. Чтобы подтвердить влияние расторопши на познание, необходимы дополнительные исследования на людях.
10. Повышает иммунную систему.
Расторопша может помочь укрепить иммунный ответ человека и помочь ему бороться с инфекцией.
Исследование, проведенное в 2016 году на модели животных, показало, что экстракт расторопши улучшает иммунитет при употреблении. Более раннее исследование показало, что экстракт расторопши оказывает положительное влияние на иммунный ответ у людей.
Необходимы дополнительные исследования с участием людей, прежде чем ученые смогут с уверенностью сказать, что расторопша укрепляет иммунную систему человека.
Побочные эффекты расторопши
У расторопши мало побочных эффектов, даже если принимать ее в течение нескольких лет. У некоторых бывает тошнота, диарея, зуд и вздутие живота.
По вопросам массового производства порошка расторопши обращайтесь к нам по адресуherbext@undersun.com.cn
Ссылки: https: //academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
